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PCR試劑盒試驗引物原則
日期：2025-04-28 19:28
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摘要：
PCR試劑盒試驗引物原則：
1、引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
2、引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
4、避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
5、引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第2個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不...
PCR試劑盒試驗引物原則：
1、引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
2、引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
4、避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
5、引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第2個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
6、引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
7、引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。