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有血清時(shí)轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)?
有血清時(shí)的轉(zhuǎn)染
血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，但只要在DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不含血清，在轉(zhuǎn)染過(guò)程中是可以使用血清的。
轉(zhuǎn)染過(guò)程在兩步中需要使用培養(yǎng)基做為稀釋液：在DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物準(zhǔn)備過(guò)程以及復(fù)合物同細(xì)胞接觸過(guò)程。
在開(kāi)始準(zhǔn)備DNA和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時(shí)要使用無(wú)血清的培養(yǎng)基，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。但在復(fù)合物形成后，在加入細(xì)胞中前可以加入血清。
陽(yáng)離子脂質(zhì)體和DNA的*佳量在使用血清時(shí)會(huì)有所不同，因此如果你想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對(duì)條件進(jìn)行優(yōu)化。
大部分細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康。對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用一些營(yíng)養(yǎng)豐富的無(wú)血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。
對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用LIPOFECTAMINE 2000。
細(xì)胞狀態(tài)
眾所周知，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，原代細(xì)胞和傳代次數(shù)多的細(xì)胞都不是*佳選擇，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)*好，*適合轉(zhuǎn)染。
同時(shí)，我們都知道細(xì)胞的密度不宜過(guò)大，大家往往注意的都是轉(zhuǎn)染前的密度，失敗過(guò)很多次的經(jīng)歷告訴大家，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞密度更加重要。
有時(shí)候轉(zhuǎn)染時(shí)間太久，等到進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)胞已經(jīng)肆意生長(zhǎng)，漂起來(lái)了，豈不前功盡棄，流著眼淚也要告訴大家，考慮好細(xì)胞的生長(zhǎng)周期和轉(zhuǎn)染的時(shí)間進(jìn)行鋪板，建議選擇50%~80%區(qū)間密度進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。