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熒光定量PCR??擴增曲線有哪些時期

日期:2025-06-16 00:03
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摘要: 熒光定量PCR是通過檢測并記錄反應(yīng)體系中熒光信號的變化來實時監(jiān)測整個PCR進程。熒光定量PCR的擴增程序,以熒光染料法為例,擴增程序可分為擴增反應(yīng)階段和熔解反應(yīng)階段。擴增反應(yīng)階段采用兩步法擴增,每一次PCR循環(huán)結(jié)束都檢測并記錄熒光信號,由此得到一條擴增曲線。 擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線,以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo),以反應(yīng)過程中實時熒光信號強度為縱坐標(biāo)。 擴增曲線可以分成四個時期:基線期,指數(shù)期,線性期,平臺期。 ...

熒光定量PCR是通過檢測并記錄反應(yīng)體系中熒光信號的變化來實時監(jiān)測整個PCR進程。熒光定量PCR的擴增程序,以熒光染料法為例,擴增程序可分為擴增反應(yīng)階段和熔解反應(yīng)階段。擴增反應(yīng)階段采用兩步法擴增,每一次PCR循環(huán)結(jié)束都檢測并記錄熒光信號,由此得到一條擴增曲線。


擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線,以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo),以反應(yīng)過程中實時熒光信號強度為縱坐標(biāo)。


擴增曲線可以分成四個時期:基線期,指數(shù)期,線性期,平臺期。


1、基線期:擴增曲線的水平部分,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物**量的變化。


2、指數(shù)期:PCR指數(shù)擴增期,擴增曲線起峰,每個循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關(guān)系,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系。


3、線性期:PCR反應(yīng)后期,由于PCR反應(yīng)體系各成分的消耗、產(chǎn)物抑制等因素的影響,反應(yīng)效率降低,產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關(guān)系。


4、平臺期:PCR反應(yīng)停止,PCR產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響PCR擴增的因素錯綜復(fù)雜,每個反應(yīng)進入平臺期的時間和平臺期的高低都各不相同。

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